New PDF release: Automatische genetische Analytik

By Gunter Mertes, Thomas Schafer, Thomas A. Schild, Gerald Schmidt, Dagmar Schuster, Jorg vom Stein

ISBN-10: 3527300767

ISBN-13: 9783527300761

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Um der Entstehung von Primer-Dimeren vorzubeugen, ist es schlieBlich unerlaBlich, die Primer auf Intra- bzw. Inter-Primer-Komplementaritat zu iiberpriifen. (3) Desoxynukleosidtriphosphate Hochreine Desoxynukleosidtriphosphate werden von verschiedenen Herstellern, entweder als vier separate Stammlosungen oder bereits als Mischung derselben, angeboten. Sie sind zumeist bereits auf einen neutralen pH-Wert von 7,O eingestellt. Falls nicht, sollte dies nachgeholt werden. Obwohl die Tuq-DNA-Polymerase bei niedrigeren dNTP-Konzentrationen (10-50 pM) mit hoherer Genauigkeit arbeitet, werden iiblicherweise Konzentrationen von 20-200 pM je dNTP empfohlen.

12] Hradetzky, D. , ,,Taq Cycle Sequencing of Plasmid DNA Purified by Various Procedures" BFE 9 (1992), 471472. , ,,A rapid alkaline extraction method for screening recombinant plasmid DNA" Nucleic Acids Res. 7 (1979), 1513-1523. [14] Del Sal, G. , ,,A one-tube plasmid DNA mini-preparation suitable for sequencing" Nucleic Acids Res. 16 (1988), 1013. , DNA Sequencing, ,,Magnetic beads [Dynabeads@] used as solid support in purification and cycle sequencing of PCR products" User Bulletin 21 (1992).

Ublicherweise liegt die Konzentration des freien Magnesiums etwa um 0,5-2,5 mM uber der dNTP-Konzentration: Befinden sich z. B. 0,8 mM (0,2 mM fur jedes dNTP) dNTPs im Ansatz, so ist eine MgKonzentration von ca. 1,5 mM (in Abhangigkeit vom verwendeten PCR-System) optimal. Deshalb sollte bei einer Reduzierung der dNTP-Konzentration ebenfalls die Magnesiumkonzentration verringert werden. Auch die Anwesenheit von Chelatbildnern in Puffern, wie z. B. EDTA in TE-Puffer, fuhrt zu einer Verrin e rung der Magnesiumkonzentration.

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Automatische genetische Analytik by Gunter Mertes, Thomas Schafer, Thomas A. Schild, Gerald Schmidt, Dagmar Schuster, Jorg vom Stein

by Charles

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